多囊肾的分子诊断

1985年reeders等采用基因连锁的方法成功地诊断了多囊肾，开创了分子诊断多囊肾病的先河。目前分子诊断已被越来越广泛地应用，主要包括以下方法。
　　1. 基因连锁分析  自1985年首次采用基因连锁分析将pkd1基因定位于第16染色体以来，国内外先后开展了基因连锁分析诊断多囊肾的工作。目前发现的与pkd1基因连锁的微卫星遗传标记有：sm6、sm7、cw2、cw4、ac2.5、kg8、sⅲ6等。新近使用毛细管电泳－基因扫描技术使基因连锁分析更精确、检出率更高。基因连锁分析方法虽简便易行，但缺点是患者家族中至少要有其他两名患者提供dna样本，父母必须是杂合子。
　　2. 单链构象多态性分析  单链构象多态性分析（single-stranded conformational polymorphism,  cp）是指人染色体基因组dna中的单个核苷酸突变，引起突变前后dna在变性条件下形成的单链在进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳时，由于碱基三维构象不同，导致迁移速度出现差异的检测方法。多囊肾患者体内存在多个pkd基因突变，利用 cp分析技术相对简单，可以灵敏地揭示发生在150-200 dna上的点突变，对单个位点变异所致的致病基因突变检出率高。然而，由于pkd致病基因一致性和突变位点不固定性， cp检测方法仍有5%～30%漏检率。
　　3. 变性高效液相色谱分析　变性高效液相色谱（denaturing high performance liquid chromatography, dhplc）是利用离子对反向液相色谱技术，通过dna分离基质，对特定pcr反应产物进行分离。dhplc能通过温度调节的异源双链分析，自动检测单碱基替换、小片段插入和缺失等基因序列的改变。dhplc具有灵敏性高、特异性强、省时省力且成本低等优点。采用dhplc技术检测多囊肾突变检出率高达95%以上，最大检测片段可达1.5 kb，是近年来较成熟、应用最普遍的多囊肾分子诊断方法。
　　4. 其他  除以上几种方法外，还有rnase酶切保护法、荧光素原位杂交(floresence in situ hybridization, fish)技术等，应用相对较少。